| Descrizione | Descrizione: Il seguente modulo è finalizzato a fornire indicazioni generali per l’apprendimento delle principali tecniche farmacologiche utili ad identificare la risposta delle cellule a composti bioattivi. Al termine del seguente modulo, lo studente avrà acquisito le conoscenze relative allo studio di potenziali bersagli proteici di composti bioattivi. Le procedure utilizzate sono, infatti, parte della fase sperimentale pre-clinica che utilizza colture cellulari e specifiche tecniche analitiche allo scopo di identificare bersagli molecolari e meccanismi d’azione di composti con potenziale attività farmacologica. La realizzazione della presente Attività di Laboratorio si articolerà nelle seguenti fasi: - Colture cellulari: struttura di un laboratorio e principi di asepsi, modalità di crescita e mantenimento di una coltura cellulare (composizione di un terreno di crescita e suo utilizzo, ciclo cellulare, subcoltura, crescita cellulare in sospensione e/o adesione); conservazione, contaminazioni (batteri, lieviti, muffe, funghi, micoplasmi, contaminazioni crociate). Visualizzazione cellule al microscopio ottico, conta celluare (4 ore di lezione in laboratorio).
- Analisi del profilo proteico mediante Western blotting: lisi cellulare meccanica, estrazione delle proteine dalle cellule, determinazione proteica mediante saggio Bradford, analisi Western blotting (principi di base, caricamento dei campioni proteici su gel di poliacrilammide, separazione elettroforetica, trasferimento su membrana di nitrocellulosa, visualizzazione delle proteine di interesse mediante l’utilizzo di specifici anticorpi, analisi quantitativa) (4 ore di lezione in laboratorio).
- Analisi del profilo proteico mediante citofluorimetria a flusso: principi di base della tecnica, principi di fluorescenza, applicazioni, schema di un citofluorimetro a flusso (sistemi di fluidica, ottico ed elettronico, software e analisi dei dati), setting dello strumento, esempio sperimentale di analisi di espressione di proteine di interesse su campioni cellulari, esempio di analisi di ciclo e/o morte cellulare e citogramma (4 ore divise tra lezione teorica e attività in laboratorio).
- Analisi isto-morfologiche su sezioni di tessuto: allestimento e preparazione di sezioni di tessuto ottenuto da topi, colorazioni con eosina/ematossilina, visione della piattaforma di analisi confocale (visita ai miscroscopi confocale con esempi di fluorescenze su cellula e su tessuto per la valutazione qualitativa di espressione di proteine di interesse) (4 ore di lezione in laboratorio).
ISTRUZIONI PER LA SCELTA DEL MODULO Gentile Docente,
si richiede di esprimere almeno tre scelte (in ordine di preferenza) e di comunicare,
contestualmente, il numero di studenti (fino al limite massimo indicato nel modulo
prescelto) e le date prescelte (considerando improrogabilmente le indicazioni contenute nei
moduli di interesse).
Le informazioni vanno inviate entro il 21.10.2024 ai seguenti indirizzi email: alternanzascuolalavoro.difarma@unisa.it e smarzocco@unisa.it Cordialmente
prof.ssa Stefania Marzocco
Referente DIFARMA per l’Orientamento in Ingresso e in Itinere |
|---|
